蛋白质测序的发展历史

A. 人类历史上首次测出其氨基酸序列的是

可能是胰岛素。抄

蛋白质测序作为蛋袭白质功能和结构研究的一部分起始于19
世纪末期。

Sanger在其读博士后期间（时值一战）创建了蛋白质末端测序法。后来Sanger用氟二硝基苯为试剂，发现胰岛素不是人们预测的16个链，二是双链，并每一条链，检测了4－5个氨基酸序列。后来他与同事花费了4－5年的时间测出了胰岛素的全长序列。

根据文献记载时间大约是1950-1954年之间。

B. 蛋白质化学测序法原则程序课归纳为哪五个阶段

蛋白质多肽链的氨复基酸顺制序分析，即蛋白质一级结构的测定，主要包括以下几个步骤：
1.测定蛋白质分子中多肽链的数目。 通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子量之间的关系，即可确定多肽链的数目。
2.多肽链的拆分：几条多肽链借助非共价键连接在一起，称为寡聚蛋白质，如，血红蛋白为四聚体，烯醇化酶为二聚体；可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理，即可分开多肽链(亚基).

3.二硫键的断裂 几条多肽链通过二硫键交联在一起。可在用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过量的b-巯基乙醇处理，使二硫键还原为巯基，然后用烷基化试剂保护生成的巯基，以防止它重新被氧化。

4.测定每条多肽链的氨基酸组成：水解,氨基酸分析仪
5.分析多肽链的N-末端和C-末端 l多肽链端基氨基酸分为两类：N-端氨基酸和C-端氨基酸。 l在肽链氨基酸顺序分析中，最重要的是N-端氨基酸分析法。
6.多肽链断裂成多个肽段，可采用两种或多种不同的断裂方法将多肽样品断裂成两套或多套肽段或肽碎片，并将其分离开来。
7.分离肽段测定每个肽段的氨基酸顺序。
8.确定肽段在多肽链中的次序。
9.确定原多肽链中二硫键的位置。

C. 请教蛋白质质谱测序

蛋白质谱一般来讲是来用来对某个蛋白自质进行鉴定的方法
而蛋白质测序实际上就是检测蛋白质的多肽链数目，不一定要用到质谱技术

简单说，蛋白质测序的方法有很多，一般是在构建完成后，通过测序来对比之前的预测的序列是否正确。
而质谱检测一般是用在蛋白质表达纯化完成后，用来鉴定是否是最初设计的那个蛋白。

D. 什么时候发明蛋白质测序

质谱出来之后就有蛋白测序了。

E. 蛋白质测序技术_百泰派克生物

蛋白质测序技术开始是采用手工测定，此种方法既费时又费样品。后来随着生物化学回和分子生答物学学科的发展及高新技术在生物学中的应用，蛋白质测序技术发展的非常快，特别是蛋白质测序仪的出现，使得蛋白质测序工作有了很大的发展。
常见的蛋白质测序技术可服务以下几大类：蛋白质N/C端测序、edman降解测序、蛋白全序列测定、以及基于PCR扩增的单克隆抗体测序等。
蛋白质测序技术的应用：鉴定蛋白质、表征蛋白质翻译后修饰、分析蛋白质一级结构与功能的关系。

F. 蛋白质测序的概念

当前，所谓蛋白质测序，主要指的是蛋白质的一级结构的测定。蛋白质的内一级结构(Primary structure)包括容组成蛋白质的多肽链数目。很多场合多肽和蛋白质可以等同使用。多肽链的氨基酸顺序，它是蛋白质生物功能的基础。
蛋白质氨基酸顺序的测定是蛋白质化学研究的基础。自从1953年F.Sanger测定了胰岛素的一级结构以来，现在已经知道约十万个不同蛋白质的一级结构。

G. 蛋白质顺序分析的研究历史

历史上第一个被确定氨基酸序列的肽（蛋白质）——胰岛素（insulin）。
1943－53年，内Sanger确定了牛胰容岛素的一级结构，1958年获得Nobel化学奖。
1958年，Moore 和 Stein在Sanger 和Edman测序法基础上设计出氨基酸全自动分析仪，获1972年Nobel化学奖。
历史上第一个被确定氨基酸序列的酶（1960年）——核酸酶（ribonuclease, 124 AA）。

H. 蛋白质测序方法

Sanger试剂用于鉴定蛋抄白质和多肽的N－末端氨基酸残基。
Edman降解才是氨基酸序列的测定技术。但是它不能测超过40个残基的序列。
所以测大的蛋白质的序列时，需要用化学试剂将蛋白质降解为一些肽段。即需要水解。水解时一般用三氟乙酸进行酸水解。

酸水解就是加热酸进行水解，而碱水解就是加入碱进行水解。蛋白质一般用酸水解。而酯类则两种水解方式都常用。

知道了吗？^_^

I. 生化1 关于蛋白质测序

应该是有两个亚基 每个15kd 好难啊

J. 生物学的发展历程

1859年 Charles Darwin 出版《物种起源》：提出了“过度繁殖、生存竞争、自然选择、适者生存”的进化论。书中的大量证据对相传了几个世纪的西洋文化和“科学”——宗教的看法发起了挑战。该书首版发行的第一天就一售而空，达尔文也因此成为“英格兰最危险的人物”。但正如达尔文的朋友兼工作伙伴T.H. Huxley所说：“不了解（书中的）这些观点实在太愚蠢了。”
1865年基因时代的起点：Gregor Mendel 通过研究豌豆的遗传特征，总结出了至今仍适用于所有生物体的遗传规律。遗憾的是，在其后的35年中孟德尔关于“遗传因子”（基因）的发现都没能得到其他科学家的认同。

1910年染色体学说提出：Thomas Hunt Morgan 通过著名的“果蝇实验”证明并发展了孟德尔的遗传学理论。他认为染色体是遗传性状传递机理的物质基础，而基因是组成染色体的遗传单位。基因的突变会导致生物体遗传特性发生变化。摩尔根因此获得了1933年诺贝尔医学奖。

1941年“一个基因，一种酶”: George Beadle 和 Edward Tatum 发现,一个基因控制生成一种酶或蛋白质，他们因此获得了1958年诺贝尔医学奖。

1952年“搅拌机实验”：Martha Chase 和 Alfred Hershey 使用普通的厨房器具将病毒的蛋白质外壳和内在DNA分离开，并证明了亲代是通过DNA将遗传特征传递到子代的。Hershey 因此获得了1969年诺贝尔奖。

1953年拆开双螺旋：James Watson 和 Francis Crick 从理论上推论出DNA的分子结构—一种双螺旋。他们在此之前并没有做任何具体单一的试验工作，而是直接向Nature杂志提交了一份报告。他们的推理得到了1962年诺贝尔奖医学奖的肯定。

1967年破译遗传密码：Har Khorana, Robert Holley 和 Marshall Nirenberg 因成功解释DNA翻译成蛋白质的机制而获得了1968年诺贝尔医学奖。

1968年： Stanley Cohen 通过研究微生物导致的疾病，认识到微生物携带的抗抗生素基因在质粒（一种染色体外的环状DNA）上，并成功纯化质粒，将其插入到其他的微生物细胞内，实现了抗药性的转导。

1970年限制性酶的发现：UCSF科学家 Herb Boyer 在研究抗生素的过程中发现，某些微生物能够产生特异性的酶地切掉噬菌体的DNA。Herb Boyer分离出了“Big Dad”的限制性酶——EcoR1，在随后的几年，人们又发现了上百个限制性核酸内切酶能够特异性地作用于DNA的特殊位点。早期的研究者 Hamilton Othanel Smith因分离出新的限制性内切酶HindII而获得了1978年诺贝尔医学奖。

1972年基因重组技术：Paul Berg 将SV40病毒和大肠杆菌DNA碎片的钝性末端接合在一起，制造了重组的DNA。他与 Walter Gilbert 和 Fred Sanger 一起获得了1980年诺贝尔医学奖。

1972年“从腌牛肉到克隆”：Cohen 和 Boyer 一起研究一种方法将可以产生某种特异蛋白质的DNA片段插入微生物的质粒中，通过搅拌（发酵）促进微生物生长的同时生成需要的蛋白质——这就是生物技术工业化的基础。

1974年第一个基因重组试验：Stan Cohen, Annie Chang 和 Herb Boyer 将属于青蛙的一段DNA成功放入大肠杆菌染色体中。从此，大肠杆菌就象生物实验室中的实验小鼠一样，成为DNA重组试验的经典素材。

1975年Asilomar会议： Paul Berg 组织发起一个国际性会议召集世界著名的100多位科学家一起交流对重组DNA技术的认识，并建立一个“指南”避免其他科学家重复无谓的研究。

1975年DNA测序的发展： 哈佛大学和剑桥大学的 Walter Gilbert 和 Allan Maxam 几乎在同时发明两种技术可以用来测量基因的最基本的序列。他们和 Paul Berg 一起获得了1980 诺贝尔奖 。

1975年 Cesar Milstein，Georges Kohler 和 Niels Jerne 提出了抗体形成的“天然”选择学说。即最初进入动物体内的抗原，有选择性地与“天生”就存在于体内的“天然”抗体结合，然后一起进入细胞，并给细胞以一信号，是其产生更多的相同抗体。

1976年生物技术的突破：把细胞当作“厂房”来生产特定的激素和蛋白开始成为现实。29岁的硅谷冒险资本家 Robert Swanson 和 Herb Boyer 一起组建了Genentech 公司，目标是克隆人胰岛素。该公司1980年10月14日上市。

1978年克隆成功人胰岛素：Genentech的科学家用大肠杆菌克隆了人胰岛素，并把该技术转让给Eli Lilly公司。1982年人胰岛素成为FDA批准生产的第一种基因药物。

1985年Genentech成为世界上第一个拥有自己的生物产品的生物技术公司，其产品ProTropin能给缺乏生长激素儿童和青少年提供生长激素。

1986年聚合酶链式反应(PCR)：Kary Mullis 利用一种热稳定DNA聚合酶——Tap聚合酶，使DNA片段在几小时内复制扩增了上百万倍。虽然 Kary Mullis 在这项研究中所做的贡献因为某些原因没有得到科学界的承认，但是 Kary Mullis 终于凭着自己不懈的努力，发明人工合成DNA的“寡聚核苷酸定点诱变法”，最终获得了1993年的诺贝尔化学奖。而发生在Hoffman-LaRoche和 Promega Biotech 两者之间的PCR 技术和关键酶Taq 聚合酶的所有权之争，直到1999年才告结束。

1989年人类基因组计划的发起：该计划的目的是在2005年以前完成人类100，000个基因的图谱、序列，促进生物学研究的进步。计划投入30亿美元。

1990年首次使用基因疗法：4岁的小女孩 Ashanti DiSilva 成为第一个接受基因疗法的病人。William French Anderson 和NIH的同事在 Ashanti DiSilva 的T细胞中插入一个正常的 ADA 基因，将其注入她的血液系统。正常的T细胞以每月增长25%的速度生长，改善了她的免疫功能，Ashanti DiSilva 终于能象正常孩子一样生活。

1994 年4月18日，美国FDA宣布 Calgene's FlavrSavr 公司的西红柿——世界上第一个转基因食物将被摆放在超市的货架上售卖。FlavrSavr 公司整整花费了十二年时间和5.25亿美元的研究投入,最终获得了FDA的安全认证。但是,由于售价过高以及来自各方面的市场抵制，负债累累的 FlavrSavr 于1997年宣布破产。

1997年首个由成年动物细胞克隆的动物—— Dolly 诞生: 1997年2月，Ian Wilmut 及同僚宣布克隆羊Dolly诞生。Dolly是由一只6岁大的成年绵羊的乳腺细胞在另一只绵羊子宫内孕育而成的。

1996年基因芯片技术的产生：基因芯片无疑是基因表达和DNA测序技术的一个重大突破。一枚纤小的玻璃或硅制的微芯片，却能包含成千上万个独立的、能同时进行检测的基因。基因芯片技术从此成为制造业、探通术、成像技术和规模化分析测量的重要手段并带动新兴工业的发展。

1997年克隆鼠诞生：1997年10月3日，Dolly又增添了几位克隆伙伴——Cumulina 及其22位同胞，其中包括通过“Honolulu“ 技术进行核移植，由克隆鼠克隆而得的小鼠。它们的主人 Teruhiko Wakayama 认为，种种迹象表明，用成年哺乳动物肌肉细胞进行克隆，可以得到完整的新个体。

1997年第一个人类的人造染色体：科学家利用自然化合物合成了人造染色体——“基因盒子（Genetic cassette）”，以用于特定的基因治疗。该染色体上的基因在细胞内可以持续复制和表达达6个月之久。

1998年5月与基因组计划赛跑：J. Craig Venter 和 Perkin Elmer 合伙创建Celera 基因公司，其目的是要在比“人类基因组计划”花费更少的经费投入和时间的前提下，提前绘制出人类的全部基因序列。该公司拥有强大的测序能力和仅次于五角大楼的计算能力。

1998年11月人类基因组计划宣布将加快研究进度：DOE和NIH宣布新的5年目标是在2003年完成测序， 2001年实现基因草图的绘制。

1998年11月，James Thompson 和 John Gearhart 领导的两个研究小组分别成功地培养出了人胚胎干细胞。科学杂志把胚胎干细胞的研究列为1999年科技突破之一。这两个小组的项研究都是由 Geron Corporation公司支持的。 [August 23, 2000: NIH Publishes Final Guidelines for Stem Cell Research]

1999年9月9日：Celera 宣布已完成果蝇的基因测序，并马上开始人类基因组测序。有学者指出，Celera 将无法完成所有基因序列的检测，而且也不会将研究成果公布于众。但是还没有证据可以证明这种说法。Science 杂志有全文报道。

2000年6月26日,人类基因组计划的完成：它将给科学家免费提供90%以上的基因图谱，虽然其中难免有遗漏和错误，但是这高质量的基因序列表将帮助人类了解遗传疾病的发生原理和机制，以寻求新的治疗途径。

2001年2月15/16日，人类基因组初步分析结果发表：HGP和Celera科学家们分别将他们的初步分析结果发表在2月15日的Nature和2月16日的Science上。